Clonagem

Clonar é um processo em que se insere um fragmento de DNA num plasmídeo ou no cromossoma de um fago sendo-lhe permitido replicar-se para produzir numerosas cópias do DNA. A replicação tem normalmente lugar quando o plasmídeo ou cromossoma fágico se introduzem num hospedeiro apropriado (ex: uma bactéria ou uma célula de levedura) e o aparelho de síntese do DNA do hospedeiro replica o DNA inserido na célula hospedeira.
Normalmente, o DNA dador corresponde a uma pequena porção do genoma de uma célula e encontra-se representado por uma ou duas cópias por célula. Logo, antes de se poder extrair o DNA dador tem de se obter, a partir quer um pequena porção de tecido, quer de uma cultura de células, um número suficiente de células desejado. Depois de se ter obtido um número suficiente de células contendo o material genético pretendido, cada célula tem que ser rebentada e o material genético extraído.

A engenharia genética pode obter clones moleculares ou clones celulares. A partir destes últimos podem reconstituir-se, por manipulação hereditária, organismos idênticos e susceptiveis de serem reproduzidos "em cadeia". A descendência de um clone representa geralmente uma linhagem genética uniforme, mas existe a possibilidade de surgirem mutações.

Componente de Clonagem/Função

Dna dador

• Fonte do DNA ou gene a ser clonado.

Endonuclease de restrição

• Enzima utilizada para cortar tanto u DNA do dador como o do vector em locais específicos, de modo a que o DNA do dador possa ser inserido no vector.

Vector

• Plasmídeo ou bacteriófago utilizado para introduzir o gene a ser clonado numa célula hospedeira

Ligase de Dna

• Enzima utilizada para ligar as extremidades livres e adaptáveis do DNA do vector e do dador e assim formar um vector recombinante.

Célula hospedeira

• Geralmente uma bactéria ou uma célula de levedura. Os vectores recombinantes introduzem -se nas células hospedeiras de modo a obter maiores quantidades da molécula de DNA recombinante.

Ana Mafalda

13/03/06